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生物学论文_无细胞百白破联合疫苗腺苷酸环化酶
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摘要：文章摘要:目的 建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗（diphtheria， tetanusandacellularPertussiscombinedvaccine，DTaP）中腺苷酸环化酶毒素（adenylatecyclasetoxin，ACT）的液质联用（liquidchromatog
文章摘要:目的 建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗（diphtheria， tetanusandacellularPertussiscombinedvaccine，DTaP）中腺苷酸环化酶毒素（adenylatecyclasetoxin，ACT）的液质联用（liquidchromatography-tandemmassspectrometry，LC-MS/MS）定量检测方法。方法 对百日咳疫苗精制液、原液、DTaP成品和ACT参考品进行酶解前处理，采用BioC18（2.1 mm×150mm，3μm）为固定相，0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.3mL/min，柱温为35℃，多反应监测模式（multiplereactionmonitoring，MRM）对特定离子对进行检测。以ACT参考品建立标准曲线，对样品中的ACT准确定量，并对方法进行验证及初步应用。结果 肽段ITGDAQANVLR特异性良好，在1.25～31.25μg/mL范围内线性良好(R2>0.99)，残差平方和为2.55，不同基质稀释标准曲线的残差平方和分别为3.08和1.32，基质效应较弱。DTaP成品回收率为80%～109%、原液回收率为93%～121%、精制液回收率为112%～120%；进样精密度为2.32%；中间精密度<20%，具备较好的准确性、精密度，且不同型号仪器的系统适用性研究结果一致。将该方法用于检测4个厂家的无细胞百白破联合疫苗多个工序段含有百日咳疫苗的样品，其中2个厂家的样品均有ACT检出，且ACT在共纯化阶段不断富集达100～250倍，另2个厂家产品仅在发酵液和盐析液中检出。结论 LC-MS/MS检测方法准确性和精密度较好，基质效应弱，可用于DTaP中ACT的定量检测和工艺过程监测。
文章关键词:
论文分类号:R392-3
文章来源：《云南化工》 网址: http://www.ynhgbjb.cn/qikandaodu/2022/0126/2087.html